Påvisning af biologiske stoffer (Fehling, Biuret)

Kemi A · STX · A-niveau · Biokemi-grundlag

🧪 Påvisning af biologiske stoffer (Fehling, Biuret)

Kvalitative kemiske test påviser specifikke biologiske stoffer.

Fehling-prøven: påviser reducerende sukre (frie aldehyd-grupper). Fehling 1 (CuSO₄-opløsning, blå) + Fehling 2 (Rochelle-salt + NaOH) blandes lige før brug. Tilføj prøve, opvarm.

Positiv (reducerende sukker tilstede): rød-orange udfældning af Cu₂O.

Reaktion: aldehyd-gruppen oxideres til carboxylsyre, mens Cu²⁺ reduceres til Cu₂O.

Reducerende sukre: glucose, fructose, galactose, maltose, laktose.

Ikke-reducerende: saccharose (glucose+fructose forbundet via bindingsstedet — ingen fri aldehyd).

Tollens-prøven: alternativ for aldehyder. Sølvspejl (Ag-udfældning på reagensglassens vægge).

Biuret-prøven: påviser proteiner (peptidbindinger). Tilføj NaOH (basisk) + dråber CuSO₄ (lyseblå). Hvis protein tilstede: lilla/violet farve. Skyldes kompleksdannelse mellem Cu²⁺ og 2+ peptidbindinger. Aminosyrer alene giver ikke positiv reaktion (kun protein/peptider).

Iod-test: påviser stivelse. Tilføj Lugol (I₂ + KI). Hvis stivelse tilstede: mørk blå/sort farve. Skyldes I₂ der binder sig i amylose-spiralen. Glycogen giver rødbrun.

Sudan III: påviser fedt. Sudan III er en rød lipidopløselig farve. Når blandet med fedt: rødt fedt-fase.

Ninhydrin: påviser aminosyrer (frie amingrupper). Lilla/blå farve. Bruges også på papir-kromatografi.

Kvantitativ analyse: spektrofotometri ved bestemt bølgelængde. UV-absorbance ved 280 nm = protein. 260 nm = nukleinsyrer. **

Læringsmål

• Anvende Fehling-prøven til at påvise reducerende sukre, og forklare reaktionen kemisk
• Anvende Biuret-prøven til at påvise proteiner via peptidbindinger
• Anvende iodtest til at påvise stivelse og forklare farvereaktionen
• Anvende Sudan III til at påvise fedt og ninhydrin til at påvise aminosyrer
• Anvende spektrofotometri (260/280 nm) til kvantitativ bestemmelse af nukleinsyrer og proteiner

Sådan kan du arbejde med emnet

• Forklar, hvad Fehlings reagens kan bruges til at påvise
• Forklar, hvad Biuret-testen kan bruges til at påvise
• Beskriv, hvilket farveomslag man ser ved en positiv test i hvert af de to forsøg

Eksperiment-forslag

• Udfør Fehling-, Biuret-, iod- og Sudan III-testen på en ukendt blandet prøve, og bestem dens indhold.
• Forklar hvorfor saccharose er Fehling-negativ, mens glucose og fructose er positive.
• Mål absorbansen af en proteinopløsning ved 280 nm og relatér til koncentrationen via en standardkurve.
• Design et forsøg der kan skelne mellem en prøve med stivelse, protein og fedt udelukkende ved farvereaktioner.

Brobygning

Disse påvisningsmetoder anvendes praktisk i SRP og eksperimentelt arbejde — afslutter biokemi-grundlaget og leder til organisk kemi.